1. Σκοπός: Η παρούσα διαδικασία στοχεύει στην παροχή τυποποιημένης διαδικασίας για ασηπτικές λειτουργίες και προστασία αποστειρωμένων δωματίων.
2. Πεδίο εφαρμογής: εργαστήριο βιολογικών δοκιμών
3. Αρμόδιο Πρόσωπο: Επόπτης Ελέγχου Ποιότητας (QC)
4. Ορισμός: Κανένας
5. Προφυλάξεις ασφαλείας
Εκτελέστε αυστηρά ασηπτικές εργασίες για την αποφυγή μικροβιακής μόλυνσης. Οι χειριστές θα πρέπει να απενεργοποιούν τη λάμπα UV πριν εισέλθουν σε αποστειρωμένο δωμάτιο.
6. Διαδικασίες
6.1. Το αποστειρωμένο δωμάτιο θα πρέπει να είναι εξοπλισμένο με αποστειρωμένο χειρουργείο και θάλαμο αποχέτευσης. Η καθαριότητα του αποστειρωμένου χειρουργείου θα πρέπει να φτάνει την κατηγορία 10000. Η εσωτερική θερμοκρασία θα πρέπει να διατηρείται στους 20-24°C και η υγρασία θα πρέπει να διατηρείται στο 45-60%. Η καθαριότητα του καθαρού πάγκου θα πρέπει να φτάνει την κατηγορία 100.
6.2. Το αποστειρωμένο δωμάτιο πρέπει να διατηρείται καθαρό και απαγορεύεται αυστηρά η συσσώρευση υπολειμμάτων για την αποφυγή μόλυνσης.
6.3. Αποτρέψτε αυστηρά τη μόλυνση όλου του εξοπλισμού αποστείρωσης και των καλλιεργητικών μέσων. Όσα έχουν μολυνθεί θα πρέπει να σταματήσουν να τα χρησιμοποιούν.
6.4. Ο αποστειρωμένος χώρος θα πρέπει να είναι εξοπλισμένος με απολυμαντικά συγκέντρωσης εργασίας, όπως διάλυμα κρεσόλης 5%, αλκοόλη 70%, διάλυμα χλωρμεθειονίνης 0,1% κ.λπ.
6.5. Το αποστειρωμένο δωμάτιο θα πρέπει να αποστειρώνεται τακτικά και να καθαρίζεται με κατάλληλο απολυμαντικό, ώστε να διασφαλίζεται ότι η καθαριότητά του πληροί τις απαιτήσεις.
6.6. Όλα τα εργαλεία, τα εργαλεία, τα πιάτα και άλλα αντικείμενα που πρέπει να μεταφερθούν σε αποστειρωμένο δωμάτιο θα πρέπει να είναι ερμητικά τυλιγμένα και να αποστειρώνονται με κατάλληλες μεθόδους.
6.7. Πριν από την είσοδο στο αποστειρωμένο δωμάτιο, το προσωπικό πρέπει να πλένει τα χέρια του με σαπούνι ή απολυμαντικό και στη συνέχεια να αλλάζει ρούχα εργασίας, παπούτσια, καπέλα, μάσκες και γάντια στο θάλαμο απομόνωσης (ή να σκουπίζει ξανά τα χέρια του με αιθανόλη 70%) πριν από την είσοδο στο αποστειρωμένο δωμάτιο. Πραγματοποιεί τις εργασίες στον βακτηριακό θάλαμο.
6.8. Πριν από τη χρήση του αποστειρωμένου δωματίου, η υπεριώδης λάμπα στο αποστειρωμένο δωμάτιο πρέπει να ενεργοποιηθεί για ακτινοβολία και αποστείρωση για περισσότερο από 30 λεπτά και ο καθαρός πάγκος πρέπει να ενεργοποιηθεί ταυτόχρονα για ροή αέρα. Μετά την ολοκλήρωση της λειτουργίας, το αποστειρωμένο δωμάτιο πρέπει να καθαριστεί εγκαίρως και στη συνέχεια να αποστειρωθεί με υπεριώδη ακτινοβολία για 20 λεπτά.
6.9. Πριν από την επιθεώρηση, η εξωτερική συσκευασία του δείγματος δοκιμής θα πρέπει να διατηρείται άθικτη και δεν πρέπει να ανοιχτεί για την αποφυγή μόλυνσης. Πριν από την επιθεώρηση, χρησιμοποιήστε μπάλες από βαμβάκι με 70% αλκοόλη για την απολύμανση της εξωτερικής επιφάνειας.
6.10. Κατά τη διάρκεια κάθε λειτουργίας, θα πρέπει να διενεργείται αρνητικός έλεγχος για τον έλεγχο της αξιοπιστίας της ασηπτικής λειτουργίας.
6.11. Όταν απορροφάτε βακτηριακό υγρό, πρέπει να χρησιμοποιείτε μια μπάλα αναρρόφησης για να το απορροφήσετε. Μην αγγίζετε απευθείας το καλαμάκι με το στόμα σας.
6.12. Η βελόνα εμβολιασμού πρέπει να αποστειρώνεται με φλόγα πριν και μετά από κάθε χρήση. Μετά την ψύξη, η καλλιέργεια μπορεί να εμβολιαστεί.
6.13. Τα καλαμάκια, οι δοκιμαστικοί σωλήνες, τα τρυβλία Petri και άλλα σκεύη που περιέχουν βακτηριακό υγρό θα πρέπει να μουλιάζονται σε κουβά αποστείρωσης που περιέχει διάλυμα Lysol 5% για απολύμανση και να αφαιρούνται και να ξεπλένονται μετά από 24 ώρες.
6.14. Εάν χυθεί βακτηριακό υγρό στο τραπέζι ή στο πάτωμα, θα πρέπει αμέσως να ρίξετε διάλυμα καρβολικού οξέος 5% ή λυσόλης 3% στην μολυσμένη περιοχή για τουλάχιστον 30 λεπτά πριν την επεξεργασία. Όταν τα ρούχα εργασίας και τα καπέλα μολυνθούν με βακτηριακό υγρό, θα πρέπει να αφαιρεθούν αμέσως και να πλυθούν μετά την αποστείρωση με ατμό υψηλής πίεσης.
6.15. Όλα τα αντικείμενα που περιέχουν ζωντανά βακτήρια πρέπει να απολυμαίνονται πριν ξεπλυθούν κάτω από τη βρύση. Απαγορεύεται αυστηρά η μόλυνση των αποχετεύσεων.
6.16. Ο αριθμός των αποικιών στο αποστειρωμένο δωμάτιο θα πρέπει να ελέγχεται μηνιαίως. Με ανοιχτό τον καθαρό πάγκο, πάρτε έναν αριθμό αποστειρωμένων τρυβλίων Petri με εσωτερική διάμετρο 90 mm και εγχύστε ασηπτικά περίπου 15 ml μέσου καλλιέργειας θρεπτικού άγαρ που έχει λιώσει και ψυχθεί στους περίπου 45°C. Μετά τη στερεοποίηση, τοποθετήστε το ανάποδα στους 30 έως 35°C. Επωάστε για 48 ώρες σε επωαστήρα ℃. Αφού αποδείξετε τη στειρότητα, πάρτε 3 έως 5 πλάκες και τοποθετήστε τες αριστερά, στη μέση και δεξιά της θέσης εργασίας. Αφού ανοίξετε το κάλυμμα και τις εκθέσετε για 30 λεπτά, τοποθετήστε τες ανάποδα σε επωαστήρα 30 έως 35°C για 48 ώρες και βγάλτε τες έξω. Εξετάστε. Ο μέσος αριθμός διαφόρων βακτηρίων στην πλάκα σε μια καθαρή περιοχή κατηγορίας 100 δεν πρέπει να υπερβαίνει την 1 αποικία και ο μέσος αριθμός σε ένα καθαρό δωμάτιο κατηγορίας 10000 δεν πρέπει να υπερβαίνει τις 3 αποικίες. Εάν ξεπεραστεί το όριο, ο αποστειρωμένος χώρος πρέπει να απολυμανθεί πλήρως μέχρι οι επαναλαμβανόμενες επιθεωρήσεις να ικανοποιήσουν τις απαιτήσεις.
7. Ανατρέξτε στο κεφάλαιο (Μέθοδος Επιθεώρησης Στειρότητας) στις ενότητες "Μέθοδοι Επιθεώρησης Υγιεινής Φαρμάκων" και "Πρότυπες Λειτουργικές Πρακτικές της Κίνας για την Επιθεώρηση Φαρμάκων".
8. Τμήμα Διανομής: Τμήμα Διαχείρισης Ποιότητας
Τεχνικές οδηγίες για καθαρό δωμάτιο:
Αφού αποκτήσουμε ένα αποστειρωμένο περιβάλλον και αποστειρωμένα υλικά, πρέπει να διατηρήσουμε μια αποστειρωμένη κατάσταση για να μελετήσουμε έναν συγκεκριμένο γνωστό μικροοργανισμό ή να αξιοποιήσουμε τις λειτουργίες του. Διαφορετικά, διάφοροι μικροοργανισμοί από το εξωτερικό μπορούν εύκολα να αναμειχθούν. Το φαινόμενο της ανάμειξης άσχετων μικροοργανισμών από το εξωτερικό ονομάζεται μολυσματικά βακτήρια στη μικροβιολογία. Η πρόληψη της μόλυνσης είναι μια κρίσιμη τεχνική στη μικροβιολογική εργασία. Η πλήρης αποστείρωση αφενός και η πρόληψη της μόλυνσης αφετέρου είναι δύο πτυχές της ασηπτικής τεχνικής. Επιπλέον, πρέπει να αποτρέψουμε τους υπό μελέτη μικροοργανισμούς, ιδίως τους παθογόνους μικροοργανισμούς ή τους γενετικά τροποποιημένους μικροοργανισμούς που δεν υπάρχουν στη φύση, από το να διαφύγουν από τα πειραματικά μας δοχεία στο εξωτερικό περιβάλλον. Για τους σκοπούς αυτούς, στη μικροβιολογία, υπάρχουν πολλά μέτρα.
Το αποστειρωμένο δωμάτιο είναι συνήθως ένα μικρό δωμάτιο ειδικά διαμορφωμένο στο μικροβιολογικό εργαστήριο. Μπορεί να κατασκευαστεί με φύλλα και γυαλί. Ο χώρος δεν πρέπει να είναι πολύ μεγάλος, περίπου 4-5 τετραγωνικά μέτρα, και το ύψος πρέπει να είναι περίπου 2,5 μέτρα. Ένα δωμάτιο ασφαλείας πρέπει να δημιουργηθεί έξω από το αποστειρωμένο δωμάτιο. Η πόρτα του δωματίου ασφαλείας και η πόρτα του αποστειρωμένου δωματίου δεν πρέπει να βλέπουν στην ίδια κατεύθυνση για να αποτρέψουν τη ροή του αέρα από το να εισάγει διάφορα βακτήρια. Τόσο το αποστειρωμένο δωμάτιο όσο και το δωμάτιο ασφαλείας πρέπει να είναι αεροστεγή. Ο εσωτερικός εξοπλισμός αερισμού πρέπει να διαθέτει συσκευές φιλτραρίσματος αέρα. Το δάπεδο και οι τοίχοι του αποστειρωμένου δωματίου πρέπει να είναι λεία, να μην συγκρατούν βρωμιά και να καθαρίζονται εύκολα. Η επιφάνεια εργασίας πρέπει να είναι επίπεδη. Τόσο το αποστειρωμένο δωμάτιο όσο και το δωμάτιο ασφαλείας είναι εξοπλισμένα με υπεριώδεις λάμψεις. Οι υπεριώδεις λάμψεις στο αποστειρωμένο δωμάτιο βρίσκονται σε απόσταση 1 μέτρου από την επιφάνεια εργασίας. Το προσωπικό που εισέρχεται στο αποστειρωμένο δωμάτιο πρέπει να φοράει αποστειρωμένα ρούχα και καπέλα.
Προς το παρόν, οι αποστειρωμένοι χώροι υπάρχουν κυρίως σε μικροβιολογικά εργοστάσια, ενώ τα γενικά εργαστήρια χρησιμοποιούν καθαρό πάγκο. Η κύρια λειτουργία του καθαρού πάγκου είναι η χρήση συσκευής στρωτής ροής αέρα για την απομάκρυνση διαφόρων μικροσκοπικών σκονών, συμπεριλαμβανομένων των μικροοργανισμών, από την επιφάνεια εργασίας. Η ηλεκτρική συσκευή επιτρέπει στον αέρα να διέρχεται από το φίλτρο HEPA και στη συνέχεια να εισέρχεται στην επιφάνεια εργασίας, έτσι ώστε η επιφάνεια εργασίας να διατηρείται πάντα υπό τον έλεγχο ροής αποστειρωμένου αέρα. Επιπλέον, υπάρχει μια κουρτίνα αέρα υψηλής ταχύτητας στην πλευρά κοντά στο εξωτερικό για να αποτρέπεται η είσοδος εξωτερικού βακτηριακού αέρα.
Σε μέρη με δύσκολες συνθήκες, μπορούν επίσης να χρησιμοποιηθούν ξύλινα αποστειρωμένα κουτιά αντί για καθαρό πάγκο. Το αποστειρωμένο κουτί έχει απλή δομή και είναι εύκολο στη μετακίνηση. Υπάρχουν δύο τρύπες στο μπροστινό μέρος του κουτιού, οι οποίες εμποδίζονται από πόρτες push-pull όταν δεν λειτουργούν. Μπορείτε να τεντώσετε τα χέρια σας κατά τη λειτουργία. Το πάνω μέρος του μπροστινού μέρους είναι εξοπλισμένο με γυαλί για να διευκολύνει την εσωτερική λειτουργία. Υπάρχει μια υπεριώδης λάμπα μέσα στο κουτί, και τα σκεύη και τα βακτήρια μπορούν να τοποθετηθούν μέσα από μια μικρή πόρτα στο πλάι.
Οι ασηπτικές τεχνικές λειτουργίας όχι μόνο διαδραματίζουν καθοριστικό ρόλο στην μικροβιολογική έρευνα και εφαρμογές, αλλά χρησιμοποιούνται επίσης ευρέως σε πολλές βιοτεχνολογίες. Για παράδειγμα, στην τρανσγονική τεχνολογία, στην τεχνολογία μονοκλωνικών αντισωμάτων κ.λπ.
Ώρα δημοσίευσης: 06 Μαρτίου 2024